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熒光分光光度計測試注意事項
發(fā)布時間: 2022-09-20  點擊次數(shù): 555次

熒光分光光度計測試注意事項

①樣品應(yīng)盛在四面透光的石英比色皿(熒光池)中,如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池。

 ?、谠跓晒夥治鰰r,為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),一般需要開機預(yù)熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預(yù)熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì),盡量采用長波長、低人射光強度及短時間光照。

 ?、蹨囟茸兓梢馃晒鈴姸鹊母淖?。通常降低溫度,有利于提高熒光量子產(chǎn)率,熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異,大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大,測試溫度變化不超過±3℃,對測試結(jié)果幾乎無影響。

 ?、墚?dāng)熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時,溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中,分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變,而熒光物質(zhì)的熒光強度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。以苯胺為例:在pH=7~12的溶液中會產(chǎn)生藍色熒光,在pH<2或ph>13的溶液中都不產(chǎn)生熒光。再如,維生素B2(核黃素)在430~440nm藍光照射下會發(fā)出綠色熒光,λem為535nm。它在pH=6~7的溶液中熒光強度最大,而在pH=11時熒光消失;但在堿性溶液經(jīng)光線照射發(fā)生分解作用或在酸性KMn04氧化下都會生成熒光強度比維生素B2強得多的黃光素,并可溶于氯仿。利用此性質(zhì)可提高測定的靈敏度和選擇性。

  ⑤分子結(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中,熒光效率顯著增強。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強度。

  ⑥散射和拉曼散射是溶劑的兩種散射光,應(yīng)注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當(dāng)做熒光光譜。瑞利散射光波長與激發(fā)光波長相同,拉曼散射與激發(fā)光波長不同,而熒光物質(zhì)的熒光波長與激發(fā)光波長無關(guān),因此可以通過選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)波長將拉曼散射光與熒光分開。在測試時選擇合適的狹縫寬度,或者空白扣除,也可以對散射光的影響進行校正。

  ⑦熒光物質(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導(dǎo)致熒光強度降低,常見的熒光猝滅劑,如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現(xiàn)象,因此,在較嚴格的熒光實驗中必須除02。

 ?、鄿y試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看,以防對眼睛造成損傷。

 ?、醿x器房應(yīng)注意經(jīng)常通風(fēng),避免產(chǎn)生的臭氧在室內(nèi)富集。


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